【預期用途】
本試劑盒用于體外定性測定人血清中抗釀酒酵母IgA/IgG抗體（ASCA），臨床上主要用于克羅恩病的輔助診斷。
【檢驗原理】
本試劑盒采用酶聯免疫法（ELISA）測定標本中抗釀酒酵母抗體（ASCA）。用純化的抗原包被微孔板，制成固相載體，往包被抗原的微孔中分別加入樣本，孵育后洗滌，加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的酶標抗體，室溫孵育，經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ASCA呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中抗釀酒酵母IgA/IgG抗體（ASCA）的存在與否。
【主要組成成份】
試劑盒組成 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | |
封板膜 | 2片 | |
酶標包被板 | （12孔×8條）×1塊 | 2-8℃保存 |
陰性對照 | 500ul×1管 | 2-8℃保存 |
陽性對照 | 500ul×1管 | 2-8℃保存 |
實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應對樣品進行稀釋，血清按200倍稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測要求。
1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照2孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）。
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照100μl。然后在待測樣品孔中加入用樣品稀釋液稀釋后的待測樣品100μl。加樣時，將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后室溫溫育30分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至400ml后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，倒扣吸水紙上，輕拍幾次吸干液體。每孔加洗滌液200μl，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，倒扣吸水紙上，輕拍幾次吸干溶液。
6. 加酶：每孔加酶標試劑100μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔加入TMB溶液100μl，輕輕震蕩混勻，室溫避光顯色15分鐘。
10. 終止：每孔加終止液100μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與TMB液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
11. 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后5分鐘以內進行。
【陽性判斷值】
1. 試驗有效性：a.試劑空白標準：空白對照孔平均值＜0.1；b.陽性對照標準：(陽性對照孔平均值-空白對照孔平均值） ≥1.00； c. 陰性對照標準：(陰性對照孔平均值-空白對照孔平均值）≤0.3。
2. 陽性判斷值（CUTOFF值）的計算：陽性判斷值=（陰性對照孔平均值-空白對照孔平均值）+0.33。
OD值位于陽性判斷值附近的樣本，建議再進行重復實驗，或者與其他臨床診斷結果相結合，綜合進行結果判斷。